تحديد وقياس الجلاكوسينولات GS في الأنسجة النباتية

محمود سلامة محمود الهايشة
(Mahmoud Salama Mahmoud El-haysha)

الحوار المتمدن-العدد: 4430 - 2014 / 4 / 21 - 17:37
المحور: الطب , والعلوم
    

عزل الجلاكوسينولات glucosinolates (GS) من بعض بذور النباتات مثل (Tropaeolum majus, Putranjiva Roxburghii, and Brassica nigra) عن طريق تفككها إنزيمياً؛ أجريت وفقا للإجراءات الوصفية على النحو التالي:
- تم استخراج الجلاكوسينولات من ( 1 جرام ) بذور طازجة بواسطة محلول 70 ٪-;- الميثانول methanol ( 10 مل ) على حمام مائي (water bath).
[يعني لاستخلاص GS = 1 جرام بذور + 10 مل ميثانول 70% = الحصول على مستخلص ميثانولي من تلك البذور بها الجلاكوسينولات].
- ثم يتم ترشيح الخليط وللحصول على راشح مستخلص وتركيزه تحت ضغط تناقصي concentrated under diminished pressure على درجة حرارة 40 درجة مئوية.

- ويتم إضافة الماء بمعدل ( 0.5 مل )، وتبخير المحلول مرة أخرى Water (0.5 ml) was added and the solution was again evaporated.


- تمت إضافة الماء المقطر ( 4 مل ) إلى بقايا، تليها إضافة 1 مولر سترات منظم 1 M citrate buffer (0.2 مل ، ودرجة الحموضة pH 6.5 )، وحمض الأسكوربيك ascorbic acid (5 مليجرام)، وإضافة محلول من إنزيم الميروزيناز myrosinase بمعدل ( 0.8 مل ، الموافق لي 0.15 مليجرام من البروتين ) وترك المحلول عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة and the solution was kept at 37°C for 2 hours.

- يتم إضافة الأسيتون ( 2 مل ) ، بورات منظم ( درجة الحموضة pH 10، 3 مل ) ، و 120 ملليمولر حامض ثيوجلوكوليك thioglycolic acid,Т-;-А-;- (120 mmoles) ، اهتزاز الخليط والاحتفاظ بها في 40 درجة مئوية لمدة 2 ساعة.

- وإضافة حمض الهيدروكلوريك Hcl ( 4 مولر، 1 مل ) ، أترك المحلول عند 40 درجة مئوية لمدة 2 ساعة، و بعد أن تبرد تم استخلاص المحلول بواسطة خلات الإيثيل (إسيل أسيتات) ethyl acetate (10 مل).

- ثم تبخر المحلول تحت ضغط منخفض عند 70 درجة مئوية و حل أو أذيب الباقي في حمض الخليك acetic acid (1 مل).

- استخدام الاسبكتروفوتوميتر spectrophotometry (القياس الطيفي)، لتحديد النوعية أو الكمية من R مباشرة ( طيفيا ) ، أو بعد الانفصال من قبل اللوني ( شطف من R مع الايثانول ). U.v. على طولين موجويين تظهر أطياف of.alkyl و arylrhodanines شريطين امتصاص مميزة في λ-;-max ~ 260 ~ 295 نانومتر.

- التحليل الروتيني لأنه يكفي لاتخاذ الطيف عند 296 نانومتر. أي يمكن الاستغناء عن القياس على طولين 295 و 260 نانومتر ولاكتفاء فقط بطول موجي واحد ووهو 296 نانومتر.
# اختصارات Shortcuts:
GS: glucosinolates
TA: thioglycolic acid
ITC: isothiocyanates

# المصدر Source:
Dkobnica, Ľ-;-. and W. Knoppov (1973(. Isothiocyanates. XXXVII: A new method of determination of natural and synthetic isothiocyanates and glucosinolates. Chan, zvesti 27 (6): 799-807.
# ترجمة:
#محمود_سلامة_الهايشة (Mahmoud Salama El-Haysha)

--------------------
Isothiocyanates. XXXVII.
A new method of determination of natural and synthetic isothiocyanates and glucosinolates
Ľ-;-. DKOBNICA and W. KNOPPOV


Chan, zvesti 27 (6) 799-807 (1973(.

Determination of GS in plant tissues

The isolation of GS (from the seeds of Tropaeolum majus, Putranjiva Roxburghii, and Brassica nigra) and their enzymic cleavage was carried out according to the described procedure [7] modified as follows: Freshly made seed dust (1 g) was extracted with 70% methanol (10 ml) on a water bath. The mixture was filtered and the extract was concentrated under diminished pressure at 40°C. Water (0.5 ml) was added and the solution was again evaporated. Distilled water (4 ml) was added to the residue followed by the addition of 1 M citrate buffer (0.2 ml, pH 6.5), ascorbic acid (5 mg), a solution of the enzyme myrosinase (0.8 ml, corresponding to 0.15 mg of protein) and the solution was kept at 37°C for 2 hours. Acetone (2 ml), borate buffer (pH 10, 3 ml), and Т-;-А-;- (120 mmoles) was added, the mixture was shaken and kept at 40°C for 2 hours. Hydrochloric acid (4 N, 1 ml) was added, the solution was kept at 40°C for 2 hours and after having been cooled the solution was extracted with ethyl acetate (10 ml). The clear solution was evaporated under reduced pressure at 70°C and the residue was dissolved in acetic acid (1 ml). The solution thus obtained was used for qualitative´-or-quantitative determination of R -dir-ectly (spectrophotometrically),´-or-after separation by chromatography (elution of R with ethanol). U.v. spectra of.alkyl- and arylrhodanines show two characteristic absorption bands at λ-;-max ~260 and ~295 nm (see also [5]). For routine analysis it is sufficient to take the spectrum at 296 nm.
-----------------
[5] Knoppová-;-, V., Antoš-;-, К-;-., Drobnica, Ľ-;-., and Kristiá-;-n, P. (1972). Chem. Zvesti 26, 527.
[7] Komanová-;-, E., Knoppová-;-, V., Koman, V., and Malinová-;-, A., J. (1971). Chromatogr. 62, 132.

#محمود_سلامة_محمود_الهايشة (هاشتاغ)       Mahmoud_Salama_Mahmoud_El-haysha#          

---

اشترك في قناة ‫«الحوار المتمدن» على اليوتيوب
حوار مع الكاتب البحريني هشام عقيل حول الفكر الماركسي والتحديات التي يواجهها اليوم، اجرت الحوار: سوزان امين	حوار مع الكاتبة السودانية شادية عبد المنعم حول الصراع المسلح في السودان وتاثيراته على حياة الجماهير، اجرت الحوار: بيان بدل

كيف تدعم-ين الحوار المتمدن واليسار والعلمانية على الانترنت؟

تابعونا على:

الفيسبوك

التويتر

اليوتيوب

RSS

الانستغرام

لينكدإن

تيلكرام

بنترست

تمبلر

بلوكر

فليبورد

الموبايل

كيفية إشراك-إيصال مواضيعكم أو مواضيع تهمكم  إلى اكبر عدد ممكن من القراء والقارئات